1. 脱蜡水化
1.1置烘箱60℃烤片至切片石蜡融化---1h
1.2 立即放入100%二甲苯至石蜡脱尽---10min×2
1.3 100%酒精---5min×2
1.4 95%酒精---5min×2
1.5 85%酒精---5min×2
1.6 75%酒精---5min×2
1.7 清水浸洗（微振动）---3次(每次30秒)

2. 抗原修复
2.1 将修复液置于染色盒内（每架切片配200ml修复液）。放入盛有230ml水的电饭锅内，按下煮饭扭/或者高压锅---30min（高压锅15min）
2.2 电饭锅跳掉后，取出染色盒，室温冷却---30min
2.3 自来水冲洗，蒸馏水浸洗（微振动）---2min*3次 

3. 封闭内源性过氧化物酶                                  
3.1 3%双氧水---10min
3.2 蒸馏水浸洗（微振动）---5min*3次

4. 羊血清封闭
4.1 把冷藏的羊血清取出室温放置---15min
4.2 用免疫组化笔把每孔组织圈起来防止液体外流 
4.3 TBST浸洗组织---1次
4.4 每孔组织70ul羊血清封闭---30min
4.5 TBST浸洗组织---1次

5. 一抗孵育
5.1 培养上清80μl/抗原组织---4℃过夜(14小时)或37℃，1h
5.2 阳性对照---Vimentin （++，+）
5.3 阴性对照---清水
5.4 TBST漂洗（摇床，中速）---5min*3次 
6. 二抗孵育
6.1 湿盒复温，并把冷藏的二抗取出室温放置---15min
6.2 羊抗兔/小鼠二抗（按照说明书稀释）
6.3 50μl/抗原组织，孵育---30min，37℃
6.4 TBST漂洗（摇床，中速）---5minX3次

7. DAB显色
7.1 DAB配置按试剂盒配置
7.2 DAB 100μl/抗原组织---45s
7.3 蒸馏水冲洗---1次
7.4 蒸馏水浸洗（中度振动）---2次

8. 苏木素复染
8.1 苏木素复染--- 1-2.5min
8.2 清水浸洗---3次
8.3 TBST泛蓝---1次10-20s
8.4 清水浸洗---2次

9. 封片
9.1 75%酒精---1minX2
9.2 95%酒精---1minX2
9.3 100%酒精---1minX2
9.4 100%二甲苯---5minX2
9.5 中性树脂封片 

10．显微镜拍照